Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病病变进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次出新现人体内自身小鼠到出新现1HG乳癌流行病学腹泻的令人满意部将在学童时期就有不错的说明了，多个人体内自身小鼠阳性的学童中会有70%在小鼠转换后10年内患上乳癌，而随访15年的学童这一比重减低到84%。正因如此，占流行病学1HG乳癌一半以上的HG1HG乳癌的发作机制还没取得确实的研究工作。

更为多的人开始运用于已考虑到系统来定义1HG乳癌的令人满意：群体在出新现多种人体内自身小鼠时离开第1收尾，出新现摄入量间歇性时离开第2收尾，出新现腹泻时离开第3收尾。一些多发人体内自身小鼠阳性的群体，在1期和2期，令人满意较相对来说速度快，并转变为发作的1HG乳癌。我们先前说明了了一组成员在首次测定到多种人体内自身小鼠样本后有数10年无乳癌的总括相对来说速度快令人满意者，这组成员患儿多人少，但构造比较明确。随后，我们发现人体内自身抗体特异性CD8+T巨噬细胞催化在令人满意相对来说较相对来说速度快的患儿中会基本不存在，但在早先发作和依然存在的乳癌患儿中会很比较容易测定到。这可能指出，与令人满意患儿相对来说，这些患儿诱发催化的调节加强。

早期研究工作指出，尽管调节性T巨噬细胞(Treg)数量但会，但乳癌患儿存在一些系统缺陷，其中会以外对IL-2的催化技能减缓。此外，乳癌患儿中会的振荡CD4+T巨噬细胞可能对调节极具抵抗性，展现为振荡T巨噬细胞的消除消散，人为激发的Treg和人体内激发的可借Treg，以及抗体境遇的CD4+T巨噬细胞中会IL-2催化消散。本研究工作的用意是说明了了CD4+调节性T巨噬细胞(Treg)在这群人总括相对来说较相对来说速度快令人满意者中会的构造，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访一段时间为18-32年。

工具：BOX研究工作是一项以人群为基础的平行研究工作，在21岁以下确诊的患儿亲属中会检查1HG乳癌的危险因素。我们先前说明了了依然相对来说较相对来说速度快令人满意者的构造，他们保证多重人体内自身小鼠阳性最多10年，但没出新现乳癌的流行病学腹泻，相对来说速度快性或非透过性诱发。随后，10名继续保证无乳癌并愿意提供大量血液样本的相对来说较相对来说速度快令人满意者纳入T和B巨噬细胞系统比对。在目前的研究工作中会，8名相对来说速度快令人满意者(SP组成员)，中会位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的人体内自身小鼠阳性。所有的组成员织者都处于1HG乳癌令人满意的1期，尽管一些人随后失去了人体内自身小鼠对某些抗体的阳性催化，然而，一名患儿现在处于2期有数6年，但没出新现流行病学腹泻，一名患儿被诊断为乳癌，该受试者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据比对中会对该丝氨酸透过了单独审核。转化外周血单个核巨噬细胞(PBMCs)，使用多参数流式巨噬细胞绝技和T巨噬细胞消除试验审核丝氨酸中会Treg的频部将、性状和系统。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴别、表征和紧接著)透过无指导聚类比对，审核Treg性状。

结果：与健康丝氨酸相对来说，来自相对来说速度快令人满意体的梦境CD4+T巨噬细胞的指导聚类看出，激活的梦境CD4+ Treg频部将减低，与糖皮质激素可借的TNFR相关蛋白(GITR)传达减低有关。一名HbA1c升高的患儿与令人满意相对来说较相对来说速度快者和冗余的对照组成员相对来说，Treg谱有所相异。系统比对指出，与健康丝氨酸相对来说，来自相对来说较相对来说速度快令人满意体的Treg特异性的CD4+振荡T巨噬细胞消除引人注意受损。展现为对振荡CD4+T巨噬细胞CD25和CD134传达的消除减低。

平面图1 集中的性状比对看出，CD4+Treg亚HG在相对来说速度快令人满意配置文件中会减低。由FlowSOM生成的Treg室，有数在来自所有丝氨酸的活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标明物传达鉴别出新10个元簇:梦境T巨噬细胞_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +梦境T巨噬细胞;内核Treg_1;内核Treg_2;内核Treg_3;和内核Treg_4。(a)运用于9个相异Treg标明生成的10个元簇的MST。每个路由器象征性一个战略性(100个战略性)，较大的元战略性(10个元战略性)在路由器组成员外面成品。每个路由器中会的年糕平面图回应以单个标明的传达层级。(b)每个元聚类的热平面图，以看出整体标明传达。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)生成平面图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对于总质量为每个metacluster箱中会央线平面图(总质量> 0.05%)考虑到为HD和SP组成员:内核Treg_2 (e),内核Treg_3 (f),内核Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T巨噬细胞(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T巨噬细胞(l)。绿色带子象征性这些年来SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon筛选大写字母秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 运用于CITRUS的预测模HG推测，Treg频部将的减低是令人满意相对来说较相对来说速度快的标志。分级门控(a - f)和柑橘比对(g-k)相对来说较SP组成员织者和冗余的HD组成员织者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的象征性性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR传达透过转化，模拟FlowSOM群体。(b) HD(外缘)和SP(斑点)组成员以及丝氨酸SP 606(绿色)中会CD25+ cd127的频部将汇总平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控邻域的箱中会央线平面图;(c) HLA-DRloGITR−(内核Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达数值后处理，圆点引人注目新的簇被识别为SP和HD配置文件之间的相异。(j)箱中会央线平面图看出了在SP(斑点)和HD(灰点)组成员中会，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的相对于总质量(比重)。(k)直方平面图看出每个簇的性状(黑色)和Treg标明相对于传达与故事情节传达(黄色);上列，内核Treg_3;上头一行，内核Treg_4。故事情节与所有其他簇中会标明的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon筛选大写字母秩检验

平面图3 与健康献血者相对来说，令人满意相对来说较相对来说速度快者梦境treg的GITR减低。每个梦境CD4+T巨噬细胞元簇(梦境T巨噬细胞_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +梦境T巨噬细胞;内核Treg_2;内核Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个传达标明的推移。(a,b)来自HD (a)和S (b)配置文件的传达热平面图(sp606不以外在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇中会所有HD(黑色)、所有SP(黄色)和SP 606(绿色)的FlowSOM GITR传达串接，看出直方平面图(c)和汇总平面图(d)。Wilcoxon筛选大写字母秩和检验，p< 0.07(绿色)所有丝氨酸以外，p< 0.05(黄色)丝氨酸SP 606和冗余的HD不以外在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR传达，从分级门控，从所有HD(黑色)、所有SP(黄色)和SP 606(绿色)串接，看出直方平面图(e)和汇总平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon筛选大写字母秩检验

平面图4 来自相对来说较相对来说速度快令人满意的CD4+ treg巨噬细胞控制振荡CD4+T巨噬细胞的技能减缓。SP组成员用黄色的中会央线和带子回应以，HD组成员用黑色的中会央线和带子回应以，绿色的中会央线/带子回应以丝氨酸sp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞透过分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标明为CFSE, Treg按观察的比重起始。用抗CD3 /28微珠再生巨噬细胞，培育3天内透过流式巨噬细胞绝技测定。(a-d)与CD4+需要的话者相对于应以的treg培育(其会)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者培育。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE消除平均值(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除平均值。运用于阳性对照(激活的积极响应以巨噬细胞不含treg)近似值消除平均值。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相对来说较测试

平面图5 振荡CD4+T巨噬细胞对相对来说较相对来说速度快令人满意的T巨噬细胞再生的消除更敏感。SP组成员用黄色的中会央线和带子回应以，HD组成员用黑色的中会央线和带子回应以，绿色的中会央线/带子回应以丝氨酸sp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞透过分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标明，treg按观察的比重起始。用抗CD3 /28微珠再生巨噬细胞，培育3天内透过流式巨噬细胞绝技(CD25反染)和巨噬细胞因子比对。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者一同培育。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE消除三份(b)。(c,d) CD25消除三份(c)和CD134消除三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育中会的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相对来说较测试

结论：我们给出新的结论是，来自相对来说较相对来说速度快令人满意子的再生梦境CD4+Treg在GITR传达中会取得了扩展和丰富，凸显了全面性研究工作Treg在1HG乳癌后果群体中会的互补的有效性。

原文出新处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28